Caspase3/7活性細胞凋亡檢測試劑盒（綠色）

產品信息
　　Caspase3/7活性細胞凋亡檢測試劑盒是一類用于檢測細胞功能的系列工具，包括細胞活性、細胞毒性、細胞凋亡、細胞膜電位以及細胞周期等方面的指標。每種檢測方案均能提供不同熒光顏色的檢測方案。這些高效的檢測方案為從多角度研究細胞功能活動提供了一種十分有效的方法。Caspase 3/7活性細胞凋亡檢測試劑盒是通過測量Caspase 3/7的活性而用于細胞凋亡檢測的。因為Caspase-3 (CPP32/apopain)在細胞凋亡的起始過程中發揮著重要作用，因此其作為一個值得信賴的細胞凋亡指示劑廣泛地被大家所接受。Caspase 3具有特異性的底物多肽識別序列，即天冬氨酸-谷*酸-纈*酸-天冬氨酸(DEVD)。本試劑盒用Z-DEVD-Rh 110-DVED-Z作為Caspase-3活性的熒光指示劑。通過Caspase 3作用，斷裂Rh 110多肽，產生具有強烈綠色熒光的Rh 110，檢測其在520-530 nm處的熒光強度，其激發光波長在340~350nm處。
產品優勢
　　本試劑盒提供所有必需組分和合適檢測方案。本檢測法強大、穩定，能夠用于多種熒光研究平臺的高通量分析中，例如微孔板分析，免疫組化和流式細胞術。使用時96孔板時，每孔用100ul試劑，本試劑盒提供的試劑足夠進行200次檢測；用384微孔板時，每孔加25ul試劑，本試劑盒提供的試劑足夠進行800次檢測。
技術資料
1.Ex(nm)：500
2.Em(nm)：522
訂購信息

產品組分

實驗方案
1.用測試化合物（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）制備細胞。
2.加入等體積的Caspase 3/7工作溶液。
3.在室溫下孵育1小時。
4.監測Ex / Em = 490/525 nm處的熒光強度（截止= 515 nm）。
5.將50μLCaspase3/7底物（組分A）加入10mL測定緩沖液（組分B）中并充分混合以制備Caspase 3/7工作溶液。
操作步驟
1.通過將10μL/孔的10X測試化合物（96孔板）或5μL/孔的5X測試化合物（384孔板）加入PBS或所需緩沖液中來處理細胞。對于空白孔（沒有細胞的培養基），加入相同量的化合物緩沖液。
2.將細胞板在37℃，5％CO2，培養箱中孵育所需的一段時間（對于用喜*堿處理的Jurkat細胞，4-6小時）以誘導細胞凋亡。
3.加100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Caspase 3/7工作溶液。
4.將板在室溫下孵育至少1小時，避光。
【注】：如果需要，在室溫下加入Caspase 3/7工作溶液10分鐘后，將1μL1mM Ac-DEVD-CHO caspase 3/7抑制劑加入到選定的樣品中，以確認抑制半胱天冬酶3/7樣活動。
5.以800rpm離心細胞板（特別是對于非貼壁細胞）2分鐘（制動關閉）。
6.用熒光酶標儀在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）下監測熒光強度。
數據分析
 
圖1. Jurkat細胞中半胱天冬酶3/7活性的檢測

　　Jurkat細胞在同一天以80,000個細胞/孔/90μL接種在黑色壁/透明底96孔板中。用或不用20μM喜*堿處理細胞5小時，和/或用5μM半胱天冬酶3/7抑制劑AC-DEVD-CHO處理細胞10分鐘。加入半胱天冬酶3/7工作溶液（100μL/孔）并在室溫下溫育1小時。使用NOVOstar儀器（BMG Labtech）在Ex / Em = 490 / 525nm（截止值= 515nm）下測量熒光強度。
注意事項
　　該產品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領域。